体格检查――医生检查受累骨骼肌有无力和疲劳试验阳性（即肌肉持续收缩后很快不耐受）新斯的明试验――肌注新斯的明1mg观察20分钟后受累骨骼肌的无力出现明显改善，此试验需要医生认真观察病人在肌注新斯的明前后的变化。

重复电刺激――是诊断本病的关键，但对眼肌型的敏感性太低，即使是阴性仍不能除外眼肌型重症肌无力，但全身型的患者一般都能发现低频刺激衰减阳性，高频刺激应同时进行以除外肌无力综合征。

乙酰胆碱受体抗体（AChR抗体）――也是诊断本病的重要依据，但其特异性受检测方法影响很大，放射免疫法测定的特异性高达99％，就是说一旦抗体阳性，基本就能确诊是重症肌无力；但用酶联免疫吸附法测定则特异性较差，国内基本都采用此方法，故在国内不能盲目相信抗体阳性的结果，需要咨询医生并做科学分析。该抗体的敏感性受重症肌无力类型影响很大，全身型的阳性率高，而眼肌型的阳性率则较低，抗体阴性仍不能除外本病。